Diferència clau: citometria de flux i FACS

En el context de la teoria cel·lular, les cèl·lules són la unitat bàsica estructural i funcional de tots els organismes vius. L’ordenació cel·lular és una metodologia que s’utilitza per separar diferents cèl·lules segons les característiques fisiològiques i morfològiques. Poden ser de característiques intracel·lulars o extracel·lulars. La interacció d’ADN, ARN i proteïnes es considera com a propietats interactives intracel·lulars mentre que la forma, la mida i les diferents proteïnes superficials es consideren com a propietats extracel·lulars. En la ciència actual, les metodologies d’ordenació cel·lular han ajudat a la investigació diferent en estudis biològics i també a l’establiment de nous principis mitjançant investigacions sobre medicina. L’ordenació cel·lular es realitza mitjançant diverses metodologies que inclouen tant primitius amb menys equipament com metodologies tecnològiques avançades amb l’ús de maquinària sofisticada. La metodologia utilitzada és la citometria de flux, la classificació de cèl·lules fluorescents activades (FACS), la selecció de cèl·lules magnètiques i la selecció de cèl·lules úniques. La citometria de flux i el FACS estan desenvolupats per diferenciar les cèl·lules segons les seves propietats òptiques. FACS és un tipus especialitzat de citometria de flux. La citometria de flux és una metodologia que s'utilitza durant l'anàlisi d'una població heterogènia de cèl·lules segons diferents molècules de superfície cel·lular, mida i volum que permet la investigació de cèl·lules úniques. FACS és un procés mitjançant el qual es selecciona una mostra de cèl·lules segons les seves característiques de dispersió de la llum i la fluorescència en dos o més recipients. Aquesta és la diferència clau entre la citometria de flux i el FACS.

CONTINGUTS

1. Visió general i diferència de claus 2. Què és la citometria de flux 3. Què és el FACS 4. Similituds entre citometria de flux i FACS 5. Comparació de costat a costat - Citometria de flux vs FACS en forma tabular 6. Resum

Què és la Citometria de Flux?

La citometria de flux és un mètode que s'utilitza per examinar i determinar l'expressió de molècules intracel·lulars i la superfície cel·lular i per definir i caracteritzar diferents tipus de cèl·lules. També s'utilitza per determinar el volum i la mida cel·lular i per avaluar la puresa de subpoblacions aïllades. Això permet l'avaluació multi-paràmetre de cèl·lules senzilles aproximadament al mateix temps. La citometria de flux s'utilitza per mesurar la intensitat de fluorescència que es produeix a causa d'anticossos marcats fluorescentment que ajuden a identificar proteïnes o lligands que s'uneixen a les cèl·lules associades.

Generalment, la citometria de flux inclou tres sub-sistemes principalment. Són els líquids, l’electrònica i l’òptica. A la citometria de flux hi ha disponibles cinc components principals que s'utilitzen en la selecció de cèl·lules. Són, una cèl·lula de flux (un corrent de líquid que s’utilitza per transportar-les i alinear les cèl·lules per al procés de detecció òptica), un sistema de mesurament (pot ser de diferents sistemes incloent-hi, làmpades de mercuri i xenó, refrigerades per aigua de gran potència o làsers refrigerats amb aire de baixa potència o làsers de díodes), un ADC; Sistema convertidor analògic a digital, sistema d’amplificació i un ordinador per a anàlisis. L’adquisició és el procés mitjançant el qual es recullen les dades de les mostres mitjançant el citòmetre de flux. Aquest procés està mediatitzat per un ordinador que està connectat amb el citòmetre de flux. El programari present a l’ordinador analitza la informació subministrada a l’ordinador des del citòmetre de flux. El programari també té la possibilitat d’ajustar paràmetres de l’experiment controlant el citòmetre de flux.

Què és FACS?

En el context de la citometria de flux, l’ordenació de cèl·lules activades per fluorescència (FACS) és un mètode que s’utilitza per diferenciar i ordenar una mostra d’una barreja de cèl·lules biològiques. Les cèl·lules estan separades de dos o més contenidors. El mètode d'ordenació es basa en les característiques físiques de la cèl·lula, que inclou la difusió de la llum i les característiques de fluorescència de la cèl·lula. Es tracta d’una important tècnica científica, que es pot utilitzar per obtenir resultats quantitatius i qualitatius fiables dels senyals de fluorescència que s’emeten de cada cèl·lula. Durant la FACS, inicialment, la barreja de cèl·lules prèviament obtinguda; una suspensió es dirigeix ​​cap al centre d'un estret flux de líquid que flueix ràpidament. El flux de líquid està dissenyat per tal de separar les cèl·lules de la suspensió en funció del diàmetre de cada cèl·lula. S’aplica un mecanisme de vibració al corrent de suspensió que dóna lloc a la formació de gotetes individuals.

El sistema es calibra per tal de crear un sol gotet amb una cel·la. Just abans de la formació de gotetes, la suspensió de flux es desplaça al llarg d’un aparell de mesura de fluorescència que detecta la característica de fluorescència de cada cèl·lula. En el punt de formació de les gotetes, es col·loca un anell de càrrega elèctrica que es fa una càrrega induïda a l’anell abans de la mesura de la intensitat de fluorescència. Una vegada que es formen les gotetes a partir del flux de suspensió, queda atrapada una càrrega dins de les gotetes que després entra en un sistema de desviació electrostàtica. Segons el càrrec, el sistema desvia les gotetes cap a diferents contenidors. El mètode d’aplicació de la càrrega varia segons els diferents sistemes utilitzats en FACS. L'equip utilitzat en FACS es coneix com un classificador de cèl·lules activat per fluorescència.

Quina és la similitud entre citometria de cabal i FACS?


  • La citometria de flux i el FACS estan desenvolupats per diferenciar les cèl·lules segons les seves propietats òptiques.

Quina diferència hi ha entre citometria de cabal i FACS?

Resum: Citometria de flux vs FACS

La cèl·lula és la unitat bàsica estructural i funcional de tots els organismes vius. L’ordenació cel·lular és el procés mitjançant el qual s’aïllen i es diferencien les cèl·lules en diferents categories en funció de les seves propietats intracel·lulars i extracel·lulars. La citometria de flux i el FACS són dues metodologies importants en l’ordenació cel·lular. Tots dos processos estan desenvolupats per diferenciar les cèl·lules segons les seves propietats òptiques. La citometria de flux és una metodologia que s'utilitza durant l'anàlisi d'una població heterogènia de cèl·lules segons diferents molècules de superfície cel·lular, mida i volum que permet la investigació de cèl·lules úniques. FACS és un procés mitjançant el qual es selecciona una mostra de cèl·lules segons les seves característiques de dispersió de la llum i la fluorescència en dos o més recipients. Aquesta és la diferència entre Citometria de Flux i FACS.

Descarregueu la versió PDF de la Citometria de Flux vs FACS

Podeu descarregar la versió PDF d’aquest article i utilitzar-lo per a fins fora de línia segons la nota de citació. Descarregueu la versió en PDF aquí. Diferencia entre citometria de cabal i FACS

Referència:

  1. Citometria de flux (FCM) / FACS | Ordenació de cèl·lules activada amb fluorescència (FACS). Consultat el 22 de setembre de 2017. Disponible aquí Ibrahim, Sherrif F. i Ger van den Engh. "Citometria de flux i ordenació de cèl·lules." SpringerLink, Springer, Berlín, Heidelberg, 1 de gener de 1970. Consultat el 22 de setembre de 2017. Disponible aquí

Imatge de cortesia:


  1. 'Cytometer'By Kierano - Obra pròpia, (CC BY 3.0) via Commons Wikimedia' Ordenació de cèl·lules assistides per fluorescència (FACS) B'By SariSabban - Sabban, Sari (2011) Desenvolupament d'un sistema de model in vitro per estudiar la interacció d'Equus caballus IgE amb el seu receptor FcεRI d’alta afinitat (tesi doctoral), la Universitat de Sheffield, (CC BY-SA 3.0) a través de Wikimedia Commons